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新颖的3D光学成像技术提高了荧光显微镜效率

发布日期:2024-07-24作者: ayx网页登录

  国外研究团队开发了一种新的光学成像技术——编码光片阵列显微术(CLAM),它可以高速进行3D成像,并且有充足的功率效率和柔和度,能够在扫描过程中以现存技术无法达到的水平保存活体标本。

  数十年来,科学家一直在使用荧光显微镜来研究生物细胞和生物的内部运作。但是,这些平台中的许多平台通常太慢,无法跟随3D的生物学作用,并可能在强光照射下对生物样本造成破坏。

  为了应对这些挑战,由香港大学(HKU)电气与电子工程学系副教授兼生物医学工程学学士学位课程主任、项目负责人Kevin Tsia博士领导的研究团队开发了一种新的光学成像技术——编码光片阵列显微术(CLAM)。它可以高速进行3D成像,并且具有足够的功率效率和柔和度,能够在扫描过程中以现有技术没办法达到的水平保存活体标本。

  这项先进的成像技术最近发表在《光:科学与应用》上,这项创新已经提交了美国专利申请。

  现有的3D生物显微镜平台速度较慢,因为必须依次扫描标本的全部体积,并逐点、逐行或逐平面成像。在这一些平台上,单个3D快照需要在标本上重复照明,标本的光照强度通常是日光的数千倍至百万倍,这很可能会损坏标本本身,因此不利于长期用于各种解剖学、发育生物学和神经科学等领域的生物成像。

  此外,这些平台通常很快耗尽有限的荧光“预算”——这是一个基本限制,即荧光灯只能在有限的时间内通过照明产生,然后在一个称为“光漂白”的过程中永久消失,这就限制了在一个样本上可以执行多少图像采集。

  Tsia博士说:“ 样品上的重复照明不仅会加速光致漂白,而且还会产生过多的荧光,最终无法形成最终图像。因此,荧光预算在这些成像平台上被大大浪费了。而CLAM允许以高帧速率进行3D荧光成像,与最先进的技术(每秒约10倍的体积)相当。更重要的是,它比科学实验室中广泛使用的标准3D显微镜更节能,比标准3D显微镜温和1000倍以上,这大大减少了扫描过程中对活体标本造成的损害。”

  据介绍,CLAM的核心技术是使用一对平行反射镜将单个激光束转换成高密度的“光片”阵列,以荧光激发的方式将其扩散到整个样品区域。整个3D体积内的图像可以同时(即并行化)拍摄的,而无需按其他技术的要求逐点、逐行或逐平面扫描样本。这样的CLAM中的3D并行化可产生非常柔和而有效的3D荧光成像,而不会牺牲灵敏度和速度,CLAM在降低光漂白效果方面也胜过普通的3D荧光成像方法同时,为了在CLAM中保持图像分辨率和质量,团队转向了码分复用(CDM),这是一种图像编码技术,已广泛应用于电信领域,用于同时发送多个信号。

  开发该系统的另一位博士后研究员Queenie Lai博士解释说:“这种编码技术使我们能够使用2D图像传感器同时捕获和数字重建3D中的所有图像堆栈。CDM以前从未在3D成像中使用过,我们采用了这项技术,并取得了成功。”

  作为概念验证的演示,该团队应用CLAM以每秒超过10体积的体积速率捕获微流体芯片中快速微粒流动的3D视频。

  CLAM对成像速度没有根本的限制,唯一的限制来自系统中使用的检测器(即用于拍摄快照的相机)的速度。随着高速相机技术的不断发展,CLAM始终可以挑战其极限,以达到更高的扫描速度。

  该团队进一步采取了行动,将CLAM与HKU LKS医学院新开发的组织清除技术相结合,以高帧频对小鼠肾小球和肠血管系统进行3D可视化。

  蔡医生说:“我们预计,这种组合技术可以扩展到档案生物学样本的大规模3D组织病理学研究,例如在大脑中绘制细胞组织以进行神经科学研究。由于CLAM成像比其他所有方法都要温和得多,因此它独特地有利于对生物样本以其活体形式进行长期和连续的监视。这可能会影响我们对细胞生物学许多方面的基本了解,例如不断跟踪动物胚胎发育成成年形式;实时监测细胞/生物如何被细菌或病毒感染;观察癌细胞如何被药物杀死,以及当今现存技术无法实现的其他挑战性任务。”

  CLAM可以通过最少的硬件或软件修改就适用于许多当前的显微镜系统。利用此优势,该团队计划进一步升级当前的CLAM系统,以进行细胞生物学、动植物发育生物学研究。原文链接:

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